OUVIDORIA RELATIVA A ÁREA DE FITOPATOLOGIA
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO
INSTITUTO DE BIOLOGIA
DEPARTAMENTO DE ENTOMOLOGIA E FITOPATOLOGIA
ÁREA DE FITOPATOLOGIA
IB 237 (PATOLOGIA FLORESTAL)
Atualizado em 21/03/2015
Prof. Associado, Dr. Paulo Sergio Torres Brioso (http://lattes.cnpq.br/8099996221105627)
DIAGNOSE DE ENFERMIDADES VEGETAIS
1. INTRODUÇÃO
2. SINTOMATOLOGIA
2.1. CONCEITO
2.2. CLASSIFICAÇÃO DE SINTOMAS
2.2.1. CRITÉRIOS UTILIZADOS PARA A CLASSIFICAÇÃO
2.2.2. CLASSIFICAÇÃO MORFOLÓGICA
3. TESTES UTILIZADOS NA DETECÇÃO E DIAGNOSE DE FITOPATÓGENOS
3.1. BIOLÓGICOS
3.2. FÍSICO – QUÍMICOS
3.3. SOROLÓGICOS
3.4. MOLECULARES
4. REGRAS DE PATOGENICIDADE (POSTULADOS DE KOCH)
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1. Introdução:
Em Fitopatologia são conhecidos 5 (cinco) períodos:
Período Místico, da Predisposição, Etiológico, Ecológico e Atual.
Os três últimos períodos foram os quais os testes diagnósticos mais evoluíram.
Existem 2 (dois) tipos de Diagnose:
- Indireta - Baseada exclusivamente nos Sintomas
- Direta - Baseada nos Sintomas e Sinais
A coleta, acondicionamento e remessa das amostras para análise são atividades de fundamental importância e variam com o tipo de fitopatógeno a ser pesquisado e com o sintoma apresentado pela planta.
2. Sintomatologia:
2.1. Conceito:
É a ciência que estuda os sintomas decorrentes das enfermidades dos vegetais.
2.2. Classificação de Sintomas:
2.2.1. Critérios utilizados para a Classificação:
Na classificação dos sintomas podem ser utilizados os seguintes critérios:
I – Localização dos Sintomas em relação ao agente etiológico
- Sintoma Primário
- Sintoma Secundário
II – Alteração á nível celular (Sintomas Histológicos)
- Granulose
- Plasmólise
- Vacuolose.
III – Alteração á nível da fisiologia da célula (Sintomas Fisiológicos)
- Respiração
- Transpiração
- Síntese de Carbohidratos
- Síntese de Enzimas
- Síntese de Proteínas
IV – Alteração á nível de anatomia ou forma do Orgão (Sintomas Morfológicos)
2.2.2. Classificação Morfológica (Link):
- Sintomas Necróticos:
São os sintomas que antecedem a morte ou a morte propriamente dita dos tecidos.
- Plesionecrótico - Amarelecimento, Anasarca ou Encharcamento, Murcha.
- Holonecrótico - Cancro, Canelura ou "Stem Pitting", Crestamento ou Requeima, “Damping Off” ou Tombamento, Escaldadura, Estria ou Listra, Fendilhamento ou Rachadura, Gomose, Mancha, Mumificação, Necrose Vascular, Perfuração, Podridão, Pústula, Resinose, Seca, Seca dos Ponteiros ou “Die Back”
- Sintomas Plásticos:
Envolve um sub ou super-desenvolvimento dos tecidos.
- Hipoplástico - Albinismo, Afilamento foliar, Clareamento de Nervura, Clorose, Enfezamento ou Nanismo, Mosaico, Mosqueado, Roseta.
- Hiperplástico – Bronzeamento, Calo Cicatricial, Enação, Encarquilhamento ou Encrespamento, Epinastia, Espessamento de Nervura, Fasciação, Galha, Superbrotamento, Verrugose.
2.2.3. Sintoma X Sinal:
- Infecção Latente – Infecção sem apresentar sintoma visível
- Estímulo a Exteriorização do Sinal (Câmara Úmida associada á temperatura ótima)
3. Testes utilizados na Diagnose de Fitopatógenos:
3.1. Testes Biológicos (Exemplos):
- Iscas Biológicas (por exemplo: Batatinha, Folha de Mamona, Maçã, Pimentão, Tomateiro, etc) (principalmente, para Bactéria, Fungo) exemplificado através da Instrução Normativa número 28 (MAPA).
- Enxertia (principalmente, para patógenos sistêmicos ou de não transmissão mecânica)
- Plantas Indicadoras (principalmente, para Vírus e Viróide)
- Plantas Diferenciadoras (principalmente, para Fungos, Vírus e Nematóides)
- Transmissão por Cuscuta sp. (principalmente, para Vírus e Fitoplasma)
- Vetor (Ácaro, Chytrídeo, Inseto, Nematóide, Plasmodiophorideo)
3.2. Testes Físico - Químicos (Exemplos):
I - Microscopia Ótica
- Lâmina e Lamínula - Montado em Água (Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Protozoário, Straminipila) ou Corante (Fungo).
- Secções Histológicas associadas a Corantes Específicos - Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Protozoário, Straminipila, Vírus (agregados protéicos).
II - Microscopia Eletrônica
- Secções Histológicas associadas a Corantes Específicos - Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Protozoário, Straminipila, Vírus.
III - Eletroforese
- Proteína - Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Protozoário, Straminipila, Vírus.
- DNA e/ou RNA - Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Protozoário, Straminipila, Viróide, Vírus.
3.3. Testes Sorológicos (Exemplos):
- Difusão Dupla em Gel de Agar
- ELISA (“Enzyme Linked Immunosorbent Assay”) e suas modalidades
- Imunocromatográfico
Anticorpos específicos contra Proteína (s) - Bactéria, Chytrídeo, Espiroplasma, Fitoplasma, Protozoário, Vírus.
Sendo, atualmente, mais utilizado em Vírus e para alguns gêneros de Bactéria.
3.4. Testes Moleculares (Exemplos):
- “Northern Blot”
- “PCR” (“Polymerase Chain Reaction”) e suas modalidades
- “RT – PCR” (“Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction”)
- Sequenciamento de Nucleotídeos
Para a diagnose de Bactéria, Chytrideo, Espiroplasma, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Protozoário, Straminipila, Viróide, Vírus.
Na Tabela 1 são listados os principais testes adotados na detecção e diagnose dos fitopatógenos.
Tabela 1. Principais testes utilizados na detecção e diagnose dos fitopatógenos.
FITOPATÓGENO (Link) |
PRINCIPAIS TESTES UTILIZADOS NA DETECÇÃO E DIAGNOSE |
Exsudação bacteriana, Teste de Enxertia, Teste de Hipersensibilidade em Fumo ou em Tomate, Teste de Isolamento com Plantas Iscas, Transmissão por inseto-vetor (cigarrinha - específico para Xylella sp.); Isolamento em Meio de Cultura, Teste de Crescimento em Meios Específicos, Teste de Gram, Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão; ELISA e suas modalidades, Imunocromatográfico; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos, Bio PCR, multiplex PCR, nested PCR, Real Time PCR, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Teste de Isolamento com Plantas Iscas; Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão, Microscopia Eletrônica de Varredura; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Isolamento em Meio de Cultura, Transmissão por inseto-vetor (cigarrinha); Teste de Gram, Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão; ELISA e suas modalidades, Imunocromatográfico; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos, multiplex PCR, nested PCR, Bio-PCR, Real Time PCR, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Teste de Enxertia, Transmissão por Cuscuta sp., Transmissão por inseto-vetor (cigarrinha ou psilídeo); Microscopia Ótica com corantes específicos, Microscopia Eletrónica de Transmissão; ELISA e suas modalidades; nested PCR, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Isolamento em Meio de Cultura (parasita facultativo), Teste de Inoculação em Plantas Indicadoras ou de Isolamento com Plantas Iscas, Teste de Enxertia; Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão, Microscopia Eletrônica de Varredura; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos ou degenerados, multiplex PCR, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Testes de Inoculação com Plantas Iscas ou Diferenciadoras; Teste de Fragmentação de Material Vegetal, Peneiramento e Baermann em recipiente raso, Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão, Microscopia Eletrônica de Varredura; Eletroforese de Isoenzima; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos ou degenerados, multiplex PCR, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Testes de Inoculação com Plantas Iscas; Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos ou degenerados, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Teste de Enxertia, Transmissão por Inseto-Vetor (percevejo); Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão, Microscopia Eletrônica de Varredura;; ELISA e suas modalidades, ISEM, Western Blot; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos ou degenerados, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Isolamento em Meio de Cultura (parasita facultativo), Teste de Inoculação em Plantas Indicadoras ou de Isolamento com Plantas Iscas; Microscopia Ótica, Microscopia Eletrónica de Transmissão, Microscopia Eletrônica de Varredura; Dot Blot, Southern Blot, PCR com primers específicos ou degenerados, PCR-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Testes de Transmissão Mecânica (em Plantas Indicadoras ou Diferenciadoras), Teste de Enxertia; Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (Bidirecional); Dot Blot, Northern Blot, RT-PCR com primers específicos, multiplex PCR, Real Time PCR, Sequenciamento de nucleotídeos |
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Testes de Transmissão Mecânica (em Plantas Indicadoras ou Diferenciadoras), Teste de Enxertia, Transmissão por Cuscuta sp.; Transmissão por Vetores (ácaro, chytrídeo, inseto, nematoide, protozoário); Microscopia Eletrónica de Transmissão; ELISA e suas modalidades, ISEM, Teste Imunocromatográfico, Western Blot; Dot Blot, Northern Blot, Southern Blot, PCR ou RT-PCR com primers específicos ou degenerados, Lamp PCR, multiplex PCR, Real Time PCR, RCA, RCA-RFLP, Sequenciamento de nucleotídeos |
4. Regras de Patogenicidade (Postulados de Koch):
Conjunto de regras a se utilizar para estabelecer cientificamente que um fitoparasita é um patógeno.
I - Associação constante sintoma e sinal
II - Isolamento, do organismo observado, em cultura pura
III - Inoculação, de cultura pura do organismo observado, em indivíduo suscetível e sadio
IV - Re-isolamento, do organismo inoculado, em cultura pura
Parasita Facultativo - Bactéria, Espiroplasma, Fungo, Protozoário, Straminipila.
Parasita Obrigatório - Chytrídeo, Fitoplasma, Fungo, Nematóide, Plasmodiophorideo, Viróide, Vírus (Não se realizam os Postulados: Isolamento, do organismo observado, em cultura pura; Re-isolamento, do organismo inoculado, em cultura pura).
BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA
A lista bibliográfica para estudo dos tópicos acima listados pode ser acessada no endereço eletrônico http://www.fito2009.com/fitop/fitopbiblio.htm ou http://www.fito2009.com/fitop/fitoppat.htm ou http://sites.google.com/site/paulobrioso